科研机构:青岛大学医学院营养研究所、青岛市疾病预防控制中心 摘 要 目的: 研究明日叶查尔酮(Ashitabechalcone,AC)对糖尿病大鼠肝细胞胰岛素受体(insulinreceptor,InsR)和胰岛素受体底物-2(insulinreceptorsubstrate-2,IRS-2)mRNA表达的影响。 方法: 将用高脂饲料喂养加链尿佐菌素腹腔注射诱发的2型糖尿病大鼠随机分为糖尿病对照组和高、低剂量AC组,每组10只,均喂饲高脂饲料,分别每日经口灌胃给予明日叶查尔酮的剂量为0、30、10mg/kg。另设一个正常对照组为正常大鼠喂饲普通饲料,实验周期4周。 用放射免疫分析法检测血清胰岛素水平、逆转录聚合酶链式反应方法检测肝细胞InsR和IRS-2mRNA表达水平、免疫组化法测肝细胞InsR蛋白表达水平、葡萄糖氧化酶法测血糖含量。 结果: 与正常对照组比较,糖尿病对照组空腹血糖和血清胰岛素升高,而InsR和IRS-2mRNA表达水平降低。与糖尿病组比较,高剂量AC组空腹血糖和血清胰岛素降低,而InsR和IRS-2mRNA表达水平升高,各项差异均有显著性意义(P<0.05)。 结论: 明日叶查尔酮可上调2型糖尿病大鼠肝细胞InsR和IRS-2mRNA表达水平,改善胰岛素抵抗状况。 关键词:明日叶;查尔酮;胰岛素受体;胰岛素受体底物-2;胰岛素抵抗 正文: 明日叶(Angelicakeiskei)是原产于日本八丈岛的野生芹科植物,明日叶查尔酮(Ashitabechalcone,AC)是明日叶中主要有效成分。明日叶查尔酮有良好的抗氧化、抗糖尿病等作用。 近来研究发现,2型糖尿病胰岛素信号转导障碍是发生胰岛素抵抗的重要原因,胰岛素受体(insulinreceptor,InsR)和胰岛素受体底物-2(insulinreceptorsubstrate-2,IRS-2)是胰岛素信号传导通路中的关键分子。 为了探讨AC对胰岛素抵抗的影响及其可能的分子机制。本研究采用给2型糖尿病大鼠口服AC的方法,观察了AC对肝细胞InsR和IRS-2mRNA表达的影响。 1材料与方法 1.1材料 1.1.1动物和饲料 清洁级健康雄性Wista大鼠45只(山东鲁抗医药实验中心提供),6~8w龄,体重180~200g。高脂饲料由北京华阜康生物科技公司提供。 1.1.2实验样品 明日叶查尔酮由本实验室制备,经紫外分光光度法测定含量>90%。查尔酮标准品购于美国SIGMA公司。 1.1.3试剂和仪器 链尿佐菌素(STZ):美国Sigma公司产品;血清胰岛素放射免疫测定试剂盒:天津九鼎医学生物工程公司提供;RNA抽提试剂盒:天根生化科技公司产品;兔InsR多克隆抗体:美国Neomarkers公司产品;SP试剂盒:迈新生物技术开发公司生产;DYY-7C型电泳仪:北京六一仪器厂生产;凝胶成像系统:上海韵涵生物科技公司产品;紫外分光光度计UV-2000:龙尼柯仪器公司;台式高速冷冻离心机TGL-16:湘仪离心机公司产品。 1.2方法 1.2.1造模及分组 动物在本实验室适应性饲养1周后,随机取10只设为正常对照组,其余用高脂饲料喂养加腹腔注射STZ诱发糖尿病,测空腹血糖大于11.1mmol/L为造模成功。参照血糖水平将成模大鼠随机分为糖尿病对照组和高、低剂量AC组,每组10只,均饲以高脂饲料。高、低剂量AC组分别每日经口灌胃给予明日叶查尔酮30、10mg/kg。正常对照组饲以基础饲料。实验4周后,全部动物禁食12h后,水合氯醛麻醉,腹主动脉取血分离血清和取肝组织进行指标检测。 1.2.2检测指标 (1)空腹血糖、血清胰岛素水平及胰岛素抵抗指数;血清胰岛素检测:放射免疫分析法;血糖含量测定:葡萄糖酶氧化法。…